Principe
Les colorants de la poudre de paprika sont extraits par
un solvant organique. L'extrait est analysé par chromatographie
sur couche mince, puis séparé sur microcolonne de silice.
On utilise le même mélange de 90% d'éther
de pétrole et 10% d'éthanol absolu comme solvant pour l'extraction
et comme éluant pour les deux chromatographies.
Plaques de CCM: silice sur plastique
Colonne : silice 200-500, 60 A
Le solvant étant très volatil, on le conservera dans un erlenmeyer bouché.
Préparer
une cuve à chromatographie. dans un grand bécher bien
sec (pas de traces d'eau)
Mettre dans un bécher une demi-spatule de poudre
de paprika et 2 à 3mL de solvant. Triturer la poudre de paprika
dans le solvant, agiter, laisser reposer à l'air libre.
Préparer
une plaque à chromatographie
A l'aide d'une pipette pasteur , prélever par capillarité un peu d'extrait de paprika (liquide orange surnageant dans le bécher) et déposer une microgoutte sur la plaque. Laisser sécher. Développer le chromatogramme.
Pendant le développement, préparer la microcolonne.
Lorsque le développement est terminé, sortir et laisser sécher la plaque.
Reproduire à l'échelle 1/1 le chromatogramme
en indiquant les couleurs des taches. Combien de principaux colorants différents
la poudre de paprika contient-elle ? Identifier les colorants par une lettre
(a,b,c...)
Adapter l'embout de caoutchouc sur la pipette pasteur
utilisée précédemment pour déposer l'extrait
de paprika. Prélever un peu d'extrait et le déposer
sur la colonne .
Verser de l'éluant dans un petit bécher bien sec (pas de traces d'eau).
Développer la colonne en recueillant les fractions dans les petits tubes de verre. Changer de tube (en déplaçant le portoir) dès que le niveau du liquide dans le tube atteint 2cm pour le premier tube, 1cm pour les suivants ou dès qu'une couleur différente parvient en bas de la colonne.
Lorsque la colonne de silice est pratiquement décolorée, à l'exception d'un petit résidu jaune en haut de colonne, arrêter l'expérience : on a dû recueillir ainsi 8 à 9 fractions de couleur différente.
Laisser évaporer un peu le solvant sous la hotte
pour concentrer les fractions .
Analyser les fractions par chromatographie sur couche
mince, en déposant au même endroit plusieurs gouttes de chaque
échantillon car les solutions sont très diluées (voir
page suivante). On identifiera chaque échantillon par le numéro
de la fraction, indiqué légèrement au crayon sous
la ligne de dépôt.
A l'aide des chromatogrammes obtenus, déterminer quels sont les colorants (a, b, c...) présents dans chaque fraction.
Comparer l'ordre dans lequel les colorants sont sortis de la colonne, avec l'ordre dans lequel ils apparaissent sur le chromatogramme de l'extrait de paprika.
La verrerie n'ayant contenu que de l'éluant
n'a pas besoin d'être nettoyée (ne pas y mettre d'eau).